序列構(gòu)成，氮吹儀價(jià)格莖的一端連上一個(gè)熒光分子，另一端連上一個(gè)淬滅分子（ :6,(5#,8）。當(dāng)無(wú)靶序列時(shí)，分子信標(biāo) 呈莖環(huán)結(jié)構(gòu)，熒光分子和淬滅分子非常接近，熒光分子發(fā)出的熒光被淬滅分子吸收并以熱的形式散發(fā)，檢 測(cè)不到熒光信號(hào)。當(dāng)有靶序列存在時(shí)，分子信標(biāo)的環(huán)序列和靶序列特異的結(jié)合，形成的雙鏈比莖環(huán)結(jié)構(gòu)更 穩(wěn)定，熒光分子和淬滅分子分開，熒光分子發(fā)出的熒光不被淬滅分子吸收，則可檢測(cè)到熒光。 二、分子雜交的方法 !!分子雜交分為固相雜交、液相雜交和固相液相雜交。固相液相雜交是把欲檢測(cè)的核酸樣本或探針 先結(jié)合到固相載體上，再與液體中的探針或核酸樣品進(jìn)行雜交反應(yīng)，漂洗去除未反應(yīng)的探針或核酸樣品， 經(jīng)檢測(cè)雜交信號(hào)，判斷雜交結(jié)果。 !!（一）斑點(diǎn)雜交 !!斑點(diǎn)雜交（)$% &4$% #;&8’)’<7%’$(）是將 =>?或 ->?變性后直接點(diǎn)樣在硝酸纖維素膜上，探針?lè)旁陔s 交液內(nèi)進(jìn)行雜交。方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏，用于特定基因的定性分析。 ! ! ->?點(diǎn)陣（->? 7887;）是將相關(guān)的探針按順序點(diǎn)在硝酸纖維素膜上，待檢樣品放在雜交液內(nèi)，檢查樣 品中的核酸能和哪一個(gè)探針雜交。 !!基因芯片（*,(, 5#’"@）是將探針點(diǎn)在硅片上，待測(cè)樣品放在雜交液內(nèi)進(jìn)行雜交，借助計(jì)算機(jī)判斷樣品 中的核酸能和哪一個(gè)探針雜交。 ->?點(diǎn)陣和基因芯片點(diǎn)在固相上的是探針的序列，沒(méi)有進(jìn)行標(biāo)記。待測(cè) 核酸樣品在雜交前進(jìn)行標(biāo)記。 !!斑點(diǎn)雜交、 ->?點(diǎn)陣、基因芯片主要是確定待檢樣品中有沒(méi)有所要的核酸。 !!（二）原位雜交 !!原位雜交（’( @’%6 #;&8’)’<7%’$(）是用核酸探針與細(xì)胞和組織切片中的核酸進(jìn)行雜交并

對(duì)其進(jìn)行檢測(cè) 的方法。分為細(xì)胞原位雜交和組織切片原位雜交。原位雜交為核酸序列在細(xì)胞水平的定位和測(cè)定提供了 方法，可確定含有特定核酸序列的細(xì)胞類型和數(shù)目，可檢出基因和基因產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位。查明染色體中 特定基因的位置，為染色體病的診斷提供方法。 !!（三）轉(zhuǎn)移印跡技術(shù) !!轉(zhuǎn)移印跡技術(shù)是將電泳和分子雜交技術(shù)結(jié)合起來(lái)的一種試驗(yàn)方法。根據(jù)檢測(cè)樣品種類的不同又分為 三類： !!（.）A$6%#,8(印跡雜交（@$6%#,8( &4$%%’(*）! ->?分子經(jīng)限制酶切，在瓊脂糖凝膠上電泳使 ->?片段 依據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小分開，再將電泳結(jié)果從凝膠中轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，經(jīng)固定和變性后，在膜上與 探針進(jìn)行雜交，確定電泳條帶中哪一條是所要的 ->?。開始將瓊脂糖上的 ->?條帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素 膜上，采用的是用吸墨汁紙吸水（&4$%%’(*）的方法（見(jiàn)圖 .9 9?）。英國(guó)愛(ài)丁堡大學(xué)的 B)C’( A$6%#,8(博士 第十七章 /基因技術(shù)!"! 建立了此方法， !"#$%&’(印跡雜交由此

得名?，F(xiàn)在將 )*+轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上多采用轉(zhuǎn)移電泳的方法 （見(jiàn)圖 ,--.）。 圖 ,--/ !"#$%&’(印跡雜交 //（0）*"’$%&’(印跡雜交（ ("’$%&’( 12"$$3(4）/ *"’$%&’(印跡雜交是經(jīng)典的 5*+分析法。操作方法和 !"#$%&’(印跡雜交方法基本相似，是將 5*+經(jīng)電泳分開后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上進(jìn)行雜交。 //（6）7&8$&’(印跡雜交（9&8$&’( 12"$$3(4）/ 7&8$&’(印跡雜交是將蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離 后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，檢測(cè)哪一種蛋白質(zhì)能和抗體反應(yīng)，也叫免疫印跡技術(shù)。 第三節(jié) /聚合酶鏈反應(yīng) //聚合酶鏈反應(yīng)（:"2;<&’=8& >%=3( ’&=>$3"(，?@5）是一種在體外由引物介導(dǎo)的 )*+酶促合成反應(yīng)，也叫 基因擴(kuò)增技術(shù)，類似體內(nèi)的 )*+復(fù)制過(guò)程。主要是利用 )*+聚合酶依賴 )*+模板的特性，在一對(duì)引物 間誘發(fā)聚合酶反應(yīng)。整個(gè)過(guò)程包括模板變性、模板與引物退火和引物延伸三個(gè)步驟。 ?@5具有特異性 強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、對(duì)待檢材料質(zhì)量要求低等特點(diǎn)，能夠快速擴(kuò)增任何目的基因。 //開始進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)時(shí)用的聚合酶是大腸桿菌 )*+聚合酶 !的 A2&("9片段。由于此酶不耐熱， 在 )*+變性過(guò)程的高溫中失活，需要不斷的加入新的酶。